细胞实验想发高分？这些细胞的培养不能不会
2022/10/30 13:55:00 丁香园
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细胞实验是医学基础研究绕不开的一类基础实验，常见的有动物细胞培养一般有传代细胞培养和原代细胞培养。传代细胞培养较为简单，依托于稳定的商业化细胞系，其实验易于上手。原代细胞直接取材于活体组织，实验和培养的难度较大。而且原代细胞作为更接近体内环境的研究模型，在研究中有着传代细胞不可替代的重要性。
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细胞原代培养，需要重点关注以下几点：
组织选材根据自身实验的需求不同，所需要培养的原代细胞的选材组织有所不同。下表整理了常见组织取材以及操作注意事项：
细胞原代培养步骤示例自取材开始，所有操作应该在无菌环境下进行。以下以小鼠肝脏原代细胞培养为例，进行步骤详解：
选材好的组织移入 50 ml 离心管内，用无菌眼科剪将组织处理为 1 mm3 的小块。随后 1000 rpm，5 min 离心；
视组织的量加入 5~6 倍的胰酶，37 ℃ 消化 20 分钟。期间每隔 5min 可以轻柔吹打一次；
加入 3~5 ml 含有血清的培养基中止消化反应，随后将悬液过100 目孔径筛网过滤，进行离心；
加入无血清培养基 5 ml，轻柔吹打冲散，再次离心后加入含血清培养基1~2 ml；
细胞计数后，按照 5 × 105/ml 进行培养。
四个关键细节需要注意
原代细胞培养过程较慢，培养时间最少需要一周以上的时间。若 2 天后出现培养基变黄现象，且无漂浮物，可以排除污染，属于细胞生长产生 CO2 所致；
原代细胞不建议冻存，冻存可能对性状有所影响，如果必须冻存建议提高冻存液内的血清浓度；
很多原代细胞的体外培养需要加入生长因子，具体添加哪类因子，需要根据实验需求查阅文献；
消化时，如果过度消化可以降低胰酶浓度以及消化时间。如果长时间难以消化，建议在胰酶使用前可以进行37 ℃ 预热，并延长消化时间。
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