手把手教你做高中生物实验 | DNA的粗提取与鉴定（文末有惊喜）
2023/3/27 11:36:09 生命科学教育

    

    

    

     基本原理

     BASIC PRINCIPLES

     1、研磨液中的变性剂SDS是去污剂的主要成分，能溶解细胞膜，促使细胞破裂，释放出DNA，并使得蛋白质变性，抑制植物材料中DNA酶活性；NaCl利于提取时DNA溶解在研磨液中；EDTA是一种金属离子螯合剂，螯合金属二价阳离子，降低DNA酶活性，减少DNA分解；Tris是缓冲液的主要成分，稳定溶液pH值，防止DNA在pH发生变化时降解或变性。

     2、DNA不溶于酒精，而细胞中的某些物质可以溶于其中。因此，可用乙醇进一步提取出含杂质较少的DNA。

     3、DNA的嘌呤核苷酸中的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，在沸水浴条件下，它和二苯胺试剂反应形成蓝色络合物，使溶液变蓝。因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

     Ⅰ

     实验仪器耗材的准备

    

     【仪器用具】

     电子天平、研磨过滤器、微量可调移液器、吸头及吸头盒、恒温水浴锅、烧杯、试管、试管架、称量纸、小刀

     【试剂耗材】

     菜花、无水乙醇、纯水或蒸馏水、DNA的粗提取与鉴定试剂盒

    

     Ⅱ

     实验方法与步骤

    

    

     Ⅲ

     实验成功的关键

    

     【材料的选择】

     本实验选用菜花，是因为菜花细胞无色，容易观察颜色变化。取表层花的部分进行研磨是因为这个部位细胞处于迅速分裂状态，DNA含量高。

     【研磨充分与否】

     如果研磨不充分，细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量偏少，会导致看不到絮状沉淀物或沉淀物量少、用鉴定试剂鉴定不显示蓝色等。研磨充分，DNA释放的量更多，提取和鉴定的效果则更加明显。

     【研磨仪器的选择】

     相较于传统的研磨工具研钵，研磨过滤器具有研磨更快速、充分、安全、节约试剂等优势，提取和分离一“器”呵成。

     【移液动作轻柔】

     提取过程中，加入冷的无水乙醇后，需倾斜试管，吸头接触试管内壁，让溶液贴着管壁缓慢流下，切忌快速加入冲散已析出的DNA絮状物。旋转试管动作快速轻柔，并始终沿着一个方向，使得絮状物析出并凝结成团，切忌剧烈振荡，以免破坏絮状物。

     【试剂品质与配制规范】

     DNA鉴定试剂是本实验成功的关键试剂，不仅要严格遵循A、B液的配比，更要遵循“现配现用”的基本原则，以保证最佳的实验效果。

    

    

    

    

    

    

     单细胞iProtozoa

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