结核“复燃”了，试试新的检测方法——T.SPOT
2017/10/25 医学界检验频道

    

     结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)是检测结核的新技术。

     来源丨TSPOT

     结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)是一种运用IGRA技术，检测被结核分枝杆菌特异的早期分泌靶抗原6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP 10)分别刺激后释放γ-干扰素的效应T淋巴细胞，以辅助诊断结核感染的实验室检测技术。

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     如何判读T-SPOT.TB结果？

     T-SPOT.TB实验设有阴性对照孔、以植物血凝素(PHA)作为刺激原的阳性对照孔以及以ESAT-6和CFP 10作为刺激原的两个实验孔A和B；实验结果用每25万个外周血单个核细胞中斑点形成细胞(spot-forming cells，SFCs)的数目来判断阴阳性结果：

     当阴性对照孔斑点数0——5时，任意一实验孔的斑点数减去阴性对照孔斑点数大于等于6，结果判为阳性；

     当阴性对照孔斑点数6——10个时，任意一实验孔的斑点数大于等于阴性对照孔斑点数的两倍，结果判为阳性；

     如果上述标准不符合且阳性对照孔正常时，结果则判为阴性。

    

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     T-SPOT.TB有“不确定”结果吗？

     当阴性对照孔斑点数超过10个或当阳性对照孔斑点数少于20个时为“不确定”结果，需要复查，除非两个抗原孔A、B根据结果判断标准可确定为“阳性”，此检测结果有效，即为阳性结果。

     遇到“灰区”结果怎么办？

     当阴性对照孔斑点数为0——5个并且(A或B斑点数)减去(阴性对照孔斑点数)等于5——7时，此结果被认为是“灰区 ”。如果得到“灰区”结果，不能认为是“不确定”结果，也就是说处在5，6，7个斑点的结果仍然是有效的结果，应该按照我们的“结果判读标准”来确定“阴性”或“阳性”。应当利用所有可利用的相关临床信息进行判断，并跟其主治大夫进行沟通后再报结果，必要时可进行复查。

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     如何识别T-SPOT.TB特异性斑点？

     一般来说，在手工放大镜、4倍物镜显微镜或USB电子放大镜下观察到结合在底膜上的紫色点，中间色深，周围有浅色晕的点才是实验结果的斑点；斑点计数仪是根据斑点颜色饱和度、直径大小和颜色梯度进行斑点的判读。以上四种方式都可以用来辅助识别斑点。以下给出一些实例来判断斑点(蓝色圈出的斑点为有效斑点，红色圈出的斑点可以认为是无效斑点不应该计数上)。

     例1：

    

     例2：

    

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     阳性对照孔和阴性对照孔有什么意义？

     阳性对照孔和阴性对照孔作为T-SPOT.TB实验的质控，是判断实验结果是否有效的标准，每个病人都必须做阴性对照孔和阳性对照孔。

     针对一个结果的阳性对照孔具有正常反应性，说明参与反应的细胞有正常的免疫功能，大部分人群对植物血凝素都是有反应的，可能会存在少数人群对植物血凝素不敏感导致阳性对照孔没有反应或反应弱。特别指出，每个人对植物血凝素的敏感性不一样，因此即便实验中我们统一加入等量的细胞，每个人的做出来的阳性对照孔可能会有所不同，下面给出几个阳性孔的示例：

    

     阴性对照孔正常则说明参与反应的细胞在没有外界刺激下是一个稳定的状态，不会有任何免疫应答反应，大部分人群阴性对照孔不会出斑点，也同样存在少数人在没有外界刺激的情况下细胞有反应而释放γ-干扰素，导致阴性孔出较多斑点，一般这种情况AB孔也会随之出较多斑点，至于出斑点的原因，目前尚未明确，具体原因还在收集统计中，下面给出几个阴性孔的示例：

    

     阴性对照孔和阳性对照孔也具有指示整体实验情况是否正常的作用。如果一批结果阴性对照孔都有较多斑点，很有可能实验过程中存在污染；如果一批结果阳性对照孔都没有斑点或斑点都较少，那需要怀疑细胞整体反应是否异常或者第二天是否出现操作失误等。

    

    

    

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